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放線菌篩選的一般方法(1)
放線菌篩選的一般方法
摘要：放線菌是重要的抗生素產(chǎn)生菌，主要分布在土壤中（主要是鏈霉菌），其數(shù)量?jī)H次于細(xì)菌。放線菌是革蘭氏陽性細(xì)菌。因菌落呈放線狀而的得名。常以孢子或菌絲狀態(tài)存在，在自然界中分布很廣，主要以孢子繁殖。由于土壤中的微生物是各種不同種類微生物的混合體，為了研究某種微生物，就必須把它們從這些混雜的微生物群體中分離出來，從而獲得某一菌株的純培養(yǎng)。
關(guān)鍵詞：放線菌 篩選 微生物
1 放線菌的情況
放線菌（Actinobacillus）是一類主要呈菌絲狀生長(zhǎng)和以孢子繁殖的陸生性較強(qiáng)大的原核生物。因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。大多數(shù)有發(fā)達(dá)的分枝菌絲。菌絲纖細(xì)，寬度近于桿狀細(xì)菌，約0.5～1微米�？煞譃椋籂I(yíng)養(yǎng)菌絲，又稱基質(zhì)菌絲，主要功能是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有的可產(chǎn)生不同的色素，是菌種鑒定的重要依據(jù)；氣生菌絲，疊生于營(yíng)養(yǎng)菌絲上，又稱二級(jí)菌絲。是一群革蘭氏陽性、高(G+C)mol%含量(>55%)的細(xì)菌。放線菌因菌落呈放線狀而的得名。
放線菌與人類的生產(chǎn)和生活關(guān)系極為密切，廣泛應(yīng)用的抗生素約70%是各種放線菌所產(chǎn)生。一些種類的放線菌還能產(chǎn)生各種酶制劑（蛋白酶、淀粉酶、和纖維素酶等）、維生素（B12）和有機(jī)酸等。弗蘭克菌屬（Frankia）為非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的內(nèi)共生菌。此外，放線菌還可用于甾體轉(zhuǎn)化、烴類發(fā)酵、石油脫蠟和污水處理等方面。少數(shù)放線菌也會(huì)對(duì)人類構(gòu)成危害，引起人和動(dòng)植物病害。因此，放線菌與人類關(guān)系密切，在醫(yī)藥工業(yè)上有重要意義。
放線菌在自然界分布廣泛，主要以孢子或菌絲狀態(tài)存在于土壤、空氣和水中，尤其是含水量低、有機(jī)物豐富、呈中性或微堿性的土壤中數(shù)量最多。放線菌只是形態(tài)上的分類，屬于細(xì)菌界放線菌門。土壤特有的泥腥味，主要是放線菌的代謝產(chǎn)物所致。它是一個(gè)原核生物類群，主要以孢子繁殖，其次是斷裂生殖。與一般細(xì)菌一樣，多為腐生，少數(shù)寄生。 2 放線菌的培養(yǎng)基
高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基是培養(yǎng)放線菌的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基是采用化學(xué)成分完全了解的純?cè)噭┡渲贫傻呐囵B(yǎng)基，高氏一號(hào)培養(yǎng)基：碳源為可溶性淀粉、氮源為KNO3、NaCl、K2HPO4?3H2O、MgSO4?7H2O 作為無機(jī)鹽，F(xiàn)eSO4?7H2O作為微生物的微量元素，提供鐵離子等組成。
高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基需要K2HPO4?3H2O 0.125g，可溶性淀粉5g，硝酸鉀
0.25,MgSO4?7H2O 0.125g，F(xiàn)eSO4?7H2O 0.025g，氯化鈉0.125g，瓊脂5g，水250ml。配制時(shí)，先依次加入上述藥品（除瓊脂外）順序溶解，加入無菌水至250ml，調(diào)節(jié)pH＝7.4，再加入瓊脂不斷攪拌震蕩至溶化后， 121℃滅菌20分鐘。
3 土壤中放線菌的分離
編號(hào)，分裝 取6套無菌平皿，在皿底貼上標(biāo)簽，注明土壤稀釋液的稀釋度（10-3、10-4、-510）。每個(gè)稀釋度做兩個(gè)培養(yǎng)皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷凝至50℃左右的高氏一號(hào)培養(yǎng)基15~20ml左右，待冷凝成平板。另取5支盛有9ml一只盛有10ml無菌水的試管，排
-1-2-3-4-5-6列于試管架上，依次標(biāo)明10、10、10、10、10、10。
稀釋傾注分離 稱1g土樣放入10ml無菌水試管中振蕩10min，即10-1的土壤懸液，靜
-1-2置30s。用無菌吸管無菌操作取10濃度的土壤懸液1ml并加入編號(hào)10的無菌試管中，并
-2吹吸吸管2~3次，吸時(shí)伸入管底，吹時(shí)離開水面，使其混合均勻。即為10濃度的土壤稀釋
-5液。依此類推，直到稀釋至10的試管中（每個(gè)稀釋度換1支無菌吸管）。
4 倒平板分離培養(yǎng)
于上述盛有不同稀釋度菌液的培養(yǎng)皿中，倒入溶化后冷卻至45℃左右的高氏培養(yǎng)基約
10—15ml，置水平位置，迅速旋動(dòng)混勻，待凝固。（若融化的培養(yǎng)基溫度太高，會(huì)產(chǎn)生太多的冷凝水，影響觀察。）
-4-5-6用1ml無菌吸管分別精確地吸取10、10、10的稀釋菌液1ml，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無
菌培養(yǎng)皿中，每一濃度對(duì)應(yīng)兩個(gè)平板。用無菌涂布棒（從濃度小液開始）將加入平板培養(yǎng)基上的土壤稀釋液在整個(gè)平板表面涂勻，涂完一個(gè)平板用酒精燈滅菌。
5 培養(yǎng)
接種完畢，將平皿和試管放入28℃恒溫箱培養(yǎng)7天，觀察平皿上放線菌（主要是鏈霉菌）菌落。
6 菌種純化
倒平板 將加熱融化的高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基倒平板，并標(biāo)號(hào)。
平板劃線 劃線的方法很多，但無論哪種方法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使形成單個(gè)菌落。
7 進(jìn)一步鑒定
用接種鏟將平板上的菌苔連同培養(yǎng)基切下一小方塊（寬2-3mm），菌面朝上放在載玻片上，另取一潔凈載玻片置火焰上微熱后，蓋在菌苔上，輕輕按壓，使培養(yǎng)物（氣生菌絲、孢子絲和孢子）粘附（“印”）在載玻片的中央，將有印記的一面朝上，火焰固定，染色（1min），水洗，干燥，油鏡觀察。
8 確定放線菌
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