人類α-actin 啟動子真核表達載體的構建及應用

利用PCR技術克隆了人類α-actin基因的啟動子(約450bp),嘗試用去掉啟動子的pEGFP-N1作為框架結構,成功構建了真核表達載體pEGFP-N1-α-actin-P.應用Lipofectamine 2000將所構建的pEGFP-N1-α-actin-P轉染入小鼠ES細胞.通過比較,發(fā)現(xiàn)在本實驗室條件下,質粒DNA濃度以3.0～5.0 μg/mL,轉染時間約在2～3 h最佳.200 μg/mL 的G418較適宜于靶細胞的轉染與篩選.得到表達心肌α-actin和GFP的小鼠ES細胞,基本維持小鼠ES細胞的形態(tài).PCNA染色結果表明,轉染后的小鼠ES細胞具有增殖能力.α-actin抗體免疫組化染色結果表明,轉染后細胞表達α-actin和GFP,揭示構建的真核表達載體pEGFP-N1-α-actin-P轉染小鼠ES細胞,可能促進其向心肌細胞分化并對其篩選.

作 者： 楊玉艾 孫永科 華進聯(lián) 竇忠英 YANG Yu-ai SUN Yong-ke HUA Jin-lian DOU Zhong-ying   作者單位： 西北農林科技大學,陜西省干細胞工程技術中心,楊凌,712100  刊 名： 畜牧獸醫(yī)學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA  年，卷(期)： 2006 37(11)  分類號： Q813  關鍵詞： 人類α-actin啟動子   真核表達載體   小鼠ES細胞   心肌細胞  

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