海南坡鹿外周血白細胞cDNA文庫的構建

目的:構建海南坡鹿外周血白細胞eDNA文庫.方法:采用RNAiso Reagent (TAKARA)處理新鮮血液,以總BNA抽提試劑盒(上海華舜)制備總RNA.利用SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)技術,用PaWerscriptTM反轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA,LD-PeR擴增獲得cDNA雙鏈,Sfi I酶切和CHROMA APIN-400TM柱分級分離后,500bp以上的片段與pDNRLIB載體連接,電轉(zhuǎn)化入E.coli DG5a,建成原始文庫.然后擴增文庫并隨機挑取單菌落,酶切鑒定重組子插入片段大小.結果:經(jīng)鑒定,庫容量達到1.9×106克隆,原始文庫滴度為1.59×1010cfu/mL,重組率接近100%,擴增后的文庫滴度為7.4×1012cfi/mL.插入片段大小分布為0.5～2.0kb,平均長度約為1.0kb.結論:所構建文庫的各項指標均達到要求,為篩選海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料來源,且為進一步研究基因的結構和功能奠定了重要基礎.

作 者： 申明霞 劉濤 杜麗 王鳳陽 成鷹 許世英 吳科榜 李治深 符運南 林賢梅 滿初日嘎 祁超 SHEN Ming-xia LIU Tao DU Li WANG Feng-pang CHENG Ying XU Shi-ying WU Ke-bang LI Zhi-shen FU Yun-nan LIN Xian-mei MAN Chu-ri-ga QI Chao   作者單位： 申明霞,SHEN Ming-xia(華中師范大學生命科學學院,湖北,武漢,430079;海南大學農(nóng)學院,�？谑袆游锘�因工程重點實驗室,海南,�？�,570228)

劉濤,杜麗,王鳳陽,成鷹,吳科榜,李治深,滿初日嘎,LIU Tao,DU Li,WANG Feng-pang,CHENG Ying,WU Ke-bang,LI Zhi-shen,MAN Chu-ri-ga(海南大學農(nóng)學院,�？谑袆游锘�因工程重點實驗室,海南,�？�,570228)

許世英,符運南,林賢梅,XU Shi-ying,FU Yun-nan,LIN Xian-mei(海南大田國家級自然保護區(qū),海南,東方,572600)

祁超,QI Chao(華中師范大學生命科學學院,湖北,武漢,430079) 

刊 名： 生物技術  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 18(2)  分類號： Q785  關鍵詞： 海南坡鹿   外周血白細胞   cDNA文庫   SNART技術  

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