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CHO細(xì)胞高效表達(dá)載體的優(yōu)化
目的:研究分析中國倉鼠EF1-α基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列,以構(gòu)建新型高效表達(dá)載體.方法:利用常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù),構(gòu)建了一系列基于CHEF1-α基因的非翻譯區(qū)調(diào)控序列元件的新型真核表達(dá)載體.以組織型纖溶酶原激活劑突變體(k2tPA)作為報(bào)告基因,利用本室已建立的CHO-dhfr--Z+定點(diǎn)整合表達(dá)系統(tǒng)比較載體表達(dá)外源基因的能力,挑選表達(dá)量高的載體.進(jìn)一步添加翻譯增強(qiáng)子(H213及V163)序列,再進(jìn)行評價(jià).結(jié)果:CHEF1-α5'UTR及啟動子+3'UTR 1.65 kb、CHEF1-α5'UTR及啟動子+3'UTR 2.7 kb這2種組合均可有效提高目的基因tPA的表達(dá),表達(dá)效率與對照載體相比分別提高了65.9%和54.5%.在添加翻譯增強(qiáng)子V163后,載體pMCEdEF53Ⅲ-163frt-k2tPA的表達(dá)效率為對照載體的2.65倍.結(jié)論:該載體系統(tǒng)在重組蛋白藥物的研發(fā)方面具有良好的應(yīng)用前景.
作 者： 劉珊 劉志剛 張國強(qiáng) 俞煒源 LIU Shan LIU Zhi-Gang ZHANG Guo-Qiang YU Wei-Yuan 作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所,北京,100071 刊 名： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊 ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 30(4) 分類號： Q786 關(guān)鍵詞： CHEF1-α基因 CHO/dhfr-細(xì)胞 基因表達(dá) 組織型纖溶酶原激活物【CHO細(xì)胞高效表達(dá)載體的優(yōu)化】相關(guān)文章：
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