人α防御素融合表達、純化及生物活性檢測

目的:獲得大量重組人α防御素(HDα)并檢測其活性,為其深入研究提供必要的材料.方法:體外化學合成得到帶有羥氨裂解位點編碼序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表達載體構建重組表達載體pBV220-IL-4- HDα.測序正確后將重組質粒轉入大腸桿菌DH5α中進行溫度誘導表達.經羥氨裂解去除IL-4后,對所得蛋白進行純化、復性,以SDS-PAGE和生物學活性檢測鑒定其特性.結果:經溫度誘導后,融合蛋白主要以包涵體的形式表達,表達產物約占菌體總蛋白的20%;羥氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的純度約為99.8%.抑菌活性試驗和克隆形成試驗顯示,所得HDα對細菌生長有明顯的抑制作用.結論:成功地構建了HDα基因的重組表達質粒,獲得穩(wěn)定表達的工程菌,并建立了復性與純化技術,為進一步對其進行功能研究與應用奠定了基礎.

作 者： 傅海燕 張劍 路凡 蒲勤 王孝功 盧茲凡 徐俊卿 趙忠良 FU Hai-yan ZHANG Jian LU Fan PU Qin WANG Xiao-gong LU Zi-fan XU Jun-qing ZHAO Zhong-liang   作者單位： 傅海燕,張劍,路凡,蒲勤,王孝功,盧茲凡,趙忠良,FU Hai-yan,ZHANG Jian,LU Fan,PU Qin,WANG Xiao-gong,LU Zi-fan,ZHAO Zhong-liang(第四軍醫(yī)大學基礎部生物化學與分子生物學教研室,陜西,西安,710032)

徐俊卿,XU Jun-qing(第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院放射科,陜西,西安,710032) 

刊 名： 細胞與分子免疫學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類號： Q786  關鍵詞： 人α防御素(HDα)   表達   純化   生物學活性   檢測  

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