小鼠AMCase基因突變體的cDNA克隆及序列分析

目的克隆小鼠酸性哺乳動物幾丁質酶(AMCase),并進行序列分析.方法從BALB/c小鼠胃組織中提取總RNA,逆轉錄成cDNA,運用PCR技術體外擴增獲得AMCase基因,構建pMD18-T/AMCase重組載體,測序后應用DNAMAN 4.0軟件與標準序列進行比較,并通過SignalP 3.0和TMHMM Server v.2.0等服務器對等電點、氨基酸組成、信號肽和跨膜結構等特征進行分析.結果所克隆基因共編碼473個氨基酸,分子量為51.93kD,等電點為4.73,與AMCase同源性達99.57%,同屬18家族的幾丁質酶成員,由信號肽(氨基酸1～21)、催化區(qū)(氨基酸22～391)、鉸鏈區(qū)(氨基酸392～425)和結合區(qū)(氨基酸426～473)組成.編碼的蛋白質在催化區(qū)和鉸鏈區(qū)分別發(fā)生了突變,292位氨基酸由Ala(丙氨酸)突變?yōu)镻ro(脯氨酸),404位氨基酸由Thr(蘇氨酸)突變?yōu)镾er(絲氨酸).結論所克隆的基因為AMCase的一個突變體,其相關生物學信息的明確,為今后運用分子生物學技術進一步深入研究其作用奠定了基礎.

作 者： 陳凌 沈柱 劉玉峰 劉斌 劉瑛   作者單位： 710032,西安,第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院皮膚科  刊 名： 解放軍醫(yī)學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY  年，卷(期)： 2006 31(3)  分類號： Q781  關鍵詞： 酸性哺乳動物幾丁質酶   突變體   序列分析,DNA  

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