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可溶性三聚化CD40-異亮氨酸拉鏈融合蛋白的制備及鑒定
以克隆的CD40 cDNA為模板,經(jīng)多步PCR構(gòu)建羧基端融合異亮氨酸拉鏈(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6標(biāo)簽的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中獲得高效表達(dá),分子量為27kD,與理論大小相符,表達(dá)產(chǎn)物主要存在于包涵體中,對包涵體蛋白進(jìn)行稀釋復(fù)性和純化得到可溶性的sCD40IZ重組蛋白,該蛋白在溶液中的分子量為91kD,表明最有可能以三聚體形式存在.活性分析顯示該蛋白能夠與細(xì)胞上的CD40L結(jié)合,并且其結(jié)合活性與不含IZ基序的可溶性CD40相比明顯提高.這些結(jié)果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能夠促進(jìn)形成三聚體,并且具有增強(qiáng)的配基結(jié)合活性.
作 者: 徐麗慧 劉毅 何賢輝 XU Li-Hui LIU Yi HE Xian-Hui 作者單位: 徐麗慧,XU Li-Hui(暨南大學(xué)組織移植與免疫教育部重點(diǎn)實驗室,廣州,510632;暨南大學(xué)生物工程研究所,廣州,510632)劉毅,何賢輝,LIU Yi,HE Xian-Hui(暨南大學(xué)組織移植與免疫教育部重點(diǎn)實驗室,廣州,510632)
刊 名: 生物工程學(xué)報 ISTIC PKU 英文刊名: CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年,卷(期): 2006 22(3) 分類號: Q78 R392.12 關(guān)鍵詞: CD40 三聚化 異亮氨酸拉鏈 原核表達(dá) 包涵體 復(fù)性【可溶性三聚化CD40-異亮氨酸拉鏈融合蛋白的制備及鑒定】相關(guān)文章:
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